在新冠疫苗還沒全面普及的時期,各位粉絲是否面臨過被核酸檢測支配的恐懼呢?
醫務工作者2周一次鼻拭子/咽拭子已經成為常態,淚眼婆娑的時候不一定是難過或感動,還可能是剛做完核酸檢測。
在這個“邪惡”的小棉簽背后,就是在疫情期間發揮巨大作用的核酸檢測。而作為核酸檢測重要的支撐,PCR技術再一次大放異彩。
PCR實驗中,你遇到過這樣的問題嗎?
•反應不完全/反應終體積差異大
•條帶強弱不同
•樣品凝膠回收不夠
•拷貝數差異巨大
如果你曾經遇到過類似的問題,
那么你需要注意的是:PCR管上機前你離心了嗎?
要知道,PCR反應體系小,以10-50μL居多,PCR儀為底部加熱模式,如果反應混合液混勻后發生掛壁現象,用手甩小體積液體根本下不來!
這就很容易造成反應不完全或者反應終體積差異大,最終影響實際反應條件的一致性和結果的可重復性:例如條帶強弱怎么不同、樣品凝膠回收又不夠、拷貝數差很多……
PCR管體積通常是200μl,又有單管、排管、96孔板之分,并不是我們常用的ep管規格,在這種情況下,要怎么離心呢?